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點(diǎn)擊次數(shù)：17706 發(fā)布時(shí)間：2017/6/6 15:25:33
ELISA實(shí)驗(yàn)是實(shí)驗(yàn)室*常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)方法，可用于elisa測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛，包括體液（如血清、血漿）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液）、細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞、組織勻漿等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定，有些則需經(jīng)預(yù)處理。下面我們來(lái)詳細(xì)介紹一下各種樣本具體的處理方法及保存：
ELISA常見(jiàn)樣本之：血清樣本：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
Elisa常見(jiàn)樣本之：血漿樣本：
根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10％（v/v）抗凝劑（0.1M檸檬酸鈉或1%heparin或2.0%EDTA.Na2）混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
Elisa常見(jiàn)樣本之：尿液、胸腹水、腦脊液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
Elisa常見(jiàn)樣本之：細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
Elisa常見(jiàn)樣本之：細(xì)胞樣本：
檢測(cè)細(xì)胞的成份時(shí)，對(duì)于貼壁細(xì)胞，去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞10秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。對(duì)于懸浮細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍.加入適量裂解液,用槍吹打把細(xì)胞吹散。用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝然后再裂解。充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)操作。
Elisa常見(jiàn)樣本之：組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS或組織蛋白萃取試劑，緩沖液中可加入蛋白酶抑制劑。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
以上為elisa實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)樣本的處理方法詳細(xì)介紹，其他樣本處理方法可來(lái)電咨詢上海極威生物科技有限公司。
原創(chuàng)作者：上海極威生物科技有限公司
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