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組織溶酶體脂酶（酸性脂酶）活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
主要用途
組織溶酶體脂酶（酸性脂酶）活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過溶酶體脂酶反應(yīng)系統(tǒng)中，在選擇性抑制劑存在與否的情況下，底物膽固醇油酸酯水解后的游離脂肪酸，與醋酸銅反應(yīng)后的藍綠色產(chǎn)物，呈現(xiàn)吸光峰值的變化，即采用比色法來測定組織裂解萃取樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種組織裂解樣品（動物、人體、昆蟲等）溶酶體脂酶的活性檢測。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。
溶酶體酸性脂酶（lysosomal acid lipase；LAL；EC3.1.1.13），又稱為酸性膽固醇酯水解酶（acid cholesteryl ester hydrolase），是脂蛋白代謝中的水解酶（hydrolase），含有372氨基酸的糖蛋白，存在于除紅細胞外的所有組織細胞中的溶酶體內(nèi)。在酸性環(huán)境下，通過水解膽固醇酯（cholesterol ester）和甘油三酯（triacylglycerols）鍵，以降解細胞內(nèi)的脂蛋白，釋放出游離脂肪酸，調(diào)節(jié)細胞內(nèi)的脂類代謝，尤其是膽固醇合成和甘油三酯代謝。溶酶體脂酶缺陷將導致伍爾曼氏病（Wolman disease）和膽固醇酯儲積病（Cholesteryl Ester Storage Disease）。溶酶體脂酶具有治療動脈粥樣硬化（atherosclerosis）和外周血管性疾病的潛力。基于底物膽固醇油酸酯（cholesterol oleate），在溶酶體酸性脂酶特異性抑制劑氯丙嗪（chlorpromazine）存在與否的情況下，通過溶酶體酸性脂酶的水解催化，產(chǎn)生游離脂肪酸油酸（oleate），繼而與生色試劑醋酸銅反應(yīng)，產(chǎn)生藍綠色銅鹽復合物，在分光光度儀下，其吸光值的變化（715nm 波長），來定量測定溶酶體酸性脂酶的活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為：
清理液（Reagent A） 毫升
裂解液（Reagent B） 毫升
緩沖液（Reagent C） 毫升
底物液（Reagent D） 毫升
稀釋液（Reagent E） 毫升
顯色液（Reagent F） 毫升
性液（Reagent G） 毫升
標準液（Reagent H） 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里，稀釋液（Reagent E）和標準液（Reagent H）具有揮發(fā)性和毒性，注意密閉瓶蓋和操作安全；保質(zhì)期：6月
1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器
2毫升離心管：用于樣品操作的容器
15毫升錐形離心管：用于樣品制備的容器
DOUNCE勻漿器：用于裂解細胞
（微型）臺式離心機：用于樣品操作
比色皿：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析
實驗步驟
一、 樣品準備
1． 手術(shù)取出動物組織，并秤重以確定500毫克組織重量
2． （選擇步驟）放進預(yù)冷的15毫升錐形離心管
3． （選擇步驟）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次
4． 移入到一個液氮凍存管
5． 即刻放進液氮罐過夜
6． 次日從液氮罐里取出，即刻（快速度）用研磨棒碾碎組織成粉末狀（注意：切莫使組織凍融）
7． 放進一個15毫升錐形離心管
8． 加入xx毫升裂解液（Reagent B），充分混勻
9． 渦旋震蕩5，充分混勻組織顆粒群
10． 即刻放進預(yù)冷的DOUNCE勻漿器
11． 在冰槽里用勻漿棒勻化組織細胞（約20至40下）
12． 將所有組織細胞勻漿物移入1.5毫升離心管
13． 放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘，速度為800g
14． 小心移出上清液到另一個新的預(yù)冷的1.5毫升離心管
15． 放進4℃微型離心機離心15分鐘，速度為10000g
16． 小心抽去上清液，保留沉淀顆粒
17． 加入xx微升緩沖液（Reagent C）
18． 強力渦旋震蕩15
19． 移取10微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用 Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－GMS30030.1）
20． 即刻放進－70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作
二、 測定準備
1． 準備好待測樣品（例如組織裂解樣品等），置于冰槽里
2． 設(shè)定好分光光度儀（溫度為37℃）：波長715nm，使用稀釋液（Reagent E）置零
3． 緩沖液（Reagent C）室溫下均衡溫度
三、標準樣品配制
1． 準備好4個1.5毫升離心管，標記為1至4號管
2． 分別加入xx微升稀釋液（Reagent E）到2至4號管
3． 移取xx微升標準液（Reagent H）到1號管
4． 小心移取xx微升1號管的標準液（Reagent H）到2號管，混勻
5． 小心移取xx微升2號管稀釋的標準液（Reagent H）到3號管，混勻
6． 將1至4號管放進冰槽里備用，避免光照；標準管濃度見下表
| 管號 | 稀釋液（Reagent E） | 標準液（Reagent H） | 測定體系標準油酸濃度 |
| 1 | － | xx微升 | xx毫摩爾/升 |
| 2 | xx微升 | xx微升1號管 | xx毫摩爾/升 |
| 3 | xx微升 | xx微升2號管 | xx毫摩爾/升 |
| 4 | xx微升 | 0 | 0 |
四、 標準曲線測定
1． 移取xx微升稀釋液（Reagent E）到2毫升離心管
2． 加入xx微升上述配制的標準液（Reagent H）
3． 加入xx微升顯色液（Reagent F）
4． 渦旋震蕩60
5． 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為1000g
6． 小心移取1毫升藍綠色上層液相到新的比色皿
7． 即刻放進分光光度儀檢測：獲得吸光讀數(shù)
8． 重復實驗步驟1至7四次
9． 構(gòu)建標準曲線：縱座標（Y軸）為吸光讀數(shù)；橫座標（X軸）為標準油酸濃度（毫摩爾/升）
五、 背景對照測定
1． 移取xx微升緩沖液（Reagent C）到2毫升離心管
2． 加入xx微升底物液（Reagent D）
3． 加入xx微升稀釋液（Reagent E）
4． 渦旋震蕩60
5． 37℃溫度下孵育30分鐘
6． 移取100微升到新的2毫升離心管
7． 加入xx毫升稀釋液（Reagent E）
8． 加入xx微升顯色液（Reagent F）
9． 渦旋震蕩60
10． 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為1000g
11． 小心移取1毫升上層液相到新的比色皿
12． 即刻放進分光光度儀檢測：獲得背景吸光讀數(shù)
六、樣品總活性測定
1． 移取xx微升緩沖液（Reagent C）到2毫升離心管
2． 加入xx微升底物液（Reagent D）
3． 加入100微升上述制備的待測樣品（50微克樣品蛋白）
4． 渦旋震蕩60
5． 37℃溫度下孵育30分鐘
6． 移取100微升到新的2毫升離心管
7． 加入xx毫升稀釋液（Reagent E）
8． 加入xx微升顯色液（Reagent F）
9． 渦旋震蕩60
10． 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為1000g
11． 小心移取1毫升藍綠色上層液相到新的比色皿
12． 即刻放進分光光度儀檢測：獲得樣品吸光讀數(shù)
13． 實際吸光讀數(shù)：樣品吸光讀數(shù)—背景吸光讀數(shù)
14． 根據(jù)標準曲線獲得樣品對應(yīng)油酸濃度（毫摩爾/升）
七、 樣品非特異活性測定
1． 移取xx微升緩沖液（Reagent C）到2毫升離心管
2． 加入xx微升底物液（Reagent D）
3． 加入xx微升性液（Reagent G）
4． 加入100微升上述制備的待測樣品（50微克樣品蛋白）
5． 渦旋震蕩60
6． 37℃溫度下孵育30分鐘
7． 移取100微升到新的2毫升離心管
8． 加入xx毫升稀釋液（Reagent E）
9． 加入xx微升顯色液（Reagent F）
10． 渦旋震蕩60
11． 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為1000g
12． 小心移取1毫升藍綠色上層液相到新的比色皿
13． 即刻放進分光光度儀檢測：獲得吸光讀數(shù)
14． 實際吸光讀數(shù)：樣品吸光讀數(shù)—背景吸光讀數(shù)
15． 根據(jù)標準曲線獲得樣品對應(yīng)油酸濃度（毫摩爾/升）
八、 計算樣品活性
1） 樣品總活性和非特異活性計算
2） 樣品特異活性計算
注意事項
1． 本產(chǎn)品為20次操作，包括背景對照
2． 操作時，須戴手套
3． 系統(tǒng)操作過程中，背景測定只需1次
4． 樣品須澄清，至關(guān)重要
5． 比色測定后，比色皿須清洗徹di
6． 樣本讀數(shù)高于背景讀數(shù)表明具有酶活性
7． 建議待測樣本蛋白濃度為50微克/100微升；如果樣本酶活性過低或過高， 則可以增加或降低樣本量（本公司提供 Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒GMS30030.1）
8． 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品濃度
9． 溶酶體酸性脂酶單位活性定義為：在37℃，pH 5.0條件下，每分鐘內(nèi)能夠釋放1微摩爾游離脂肪酸所需的酶量作為一個活性單位
10． 本公司提供系列細胞脂類酶學檢測試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標準
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感
使用承nuo
秉著“信譽至上、客戶滿意、質(zhì)量承nuo”的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)zhi產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在保質(zhì)期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售已作嚴格的質(zhì)量鑒定，bao證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司聯(lián)系，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負責更換產(chǎn)品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
訂購信息
單組份訂購信息
編號名稱規(guī)格
GMS50100.2組織溶酶體脂酶（酸性脂酶）活性比色法定量檢測試劑盒20/80次
GMS50100.2A清理液（Reagent A） 毫升
GMS50100.2B 裂解液（Reagent B） 毫升
GMS50100.2C緩沖液（Reagent C） 毫升
GMS50100.2D 底物液（Reagent D） 毫升
GMS50100.2E 稀釋液（Reagent E）毫升
GMS50100.2F 顯色液（Reagent F）毫升
GMS50100.2G 性液（Reagent G）毫升
GMS50100.2H 標準液（Reagent H）毫升
試劑盒訂購信息
| 產(chǎn)品編號 | 名稱 | 規(guī)格 |
| GMS50100.1 | 細胞溶酶體脂酶（酸性脂酶）活性比色法定量檢測試劑盒 | 20次 |
| GMS50100.2 | 組織溶酶體脂酶（酸性脂酶）活性比色法定量檢測試劑盒 | 20次 |
| GMS50621.1 | 細胞溶酶體脂酶（酸性脂酶）活性熒光定量檢測試劑盒 | 20次 |
| GMS50621.2 | 組織溶酶體脂酶（酸性脂酶）活性熒光定量檢測試劑盒 | 20次 |
| GMS70008.1 | 細胞總脂肪酶（lipase）活性比色法定量檢測試劑盒 | 20次 |
| GMS70008.2 | 組織總脂肪酶（lipase）活性比色法定量檢測試劑盒 | 20次 |
| GMS70008.3 | 血液總脂肪酶（lipase）活性比色法定量檢測試劑盒 | 20次 |
| GMS70008.4 | 體液總脂肪酶（lipase）活性比色法定量檢測試劑盒 | 20次 |
| GMS70118.1 | 細胞總脂肪酶（lipase）活性熒光定量檢測試劑盒 | 20次 |
| GMS70118.2 | 組織總脂肪酶（lipase）活性熒光定量檢測試劑盒 | 20次 |
| GMS70118.3 | 血液總脂肪酶（lipase）活性熒光定量檢測試劑盒 | 20次 |
| GMS70118.4 | 體液總脂肪酶（lipase）活性熒光定量檢測試劑盒 | 20次 |
原創(chuàng)作者：上海極威生物科技有限公司
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