ELisa實驗顯色和比色的重要性極威生物

點擊次數(shù)：17074 發(fā)布時間：2021/6/29 19:04:42

在Elisa實驗中，顯色和比色是elisa實驗的后半段，但是這后半段的操作也是不可小視，必須得認真的來做，否則，一樣會影響實驗效果，關于顯色和比色，我們來簡單了解一下。

TMB 經(jīng)HRP 作用后，約40 分鐘顯色達頂峰，隨即逐漸減弱，至2 小時后即可完quan消退至無色。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間（12-24 小時）不褪，是目視判斷的良好終止劑。

此外，各類酸性終止液則會使藍色轉(zhuǎn)變成黃色，此時可用特定的波長（450nm）測讀吸光值。酶標比色儀簡稱酶標儀，通常指專用于測讀ELISA 結(jié)果吸光度的光度計。酶標儀的主要性能指標有：測讀速度、讀數(shù)的準que性、重復性、精que度和可測范圍、線性等等。

優(yōu)良的酶標儀的讀數(shù)一般可精que到0.001，準que性為±1%，重復性達0.5%。酶標儀不應安置在陽光或強光照射下，操作時室溫宜在15~30℃，使用前先預熱儀器15-30 分鐘，測讀結(jié)果更穩(wěn)定。

測讀A 值時，要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰，如OPD 用492nm 波長。有的酶標儀可用雙波長式測讀，即每孔先后測讀兩次，第yi次在*適波長（W1），第二次在不敏感波長（W2），兩次測定間不移動ELISA 板的位置，*終測得的A 值為兩者之差（W1-W2）。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

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