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· 資料簡(jiǎn)介： 11月9日?qǐng)?bào)道，關(guān)于禽流感病毒（AIV）elisa試劑盒說明書@公司新聞介紹稱，本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷，檢測(cè)原理試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先 包被禽流感病毒抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測(cè) 抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的 催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。用酶標(biāo)儀 在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判 定標(biāo)本中禽流感病毒（AIV）的存在與否。 禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，樣品收集、處理及保存方法： 1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞 刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地 分離。 2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘 取上清。 5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于 -20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，自備物品： 1. 酶標(biāo)儀（450nm） 2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒溫箱 禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，操作步驟： 1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封 袋密封放回 4℃。 2. 設(shè)置陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔，陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、 陽性對(duì)照各 50μL； 3. 待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL； 4. 隨后陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP） 標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫 箱溫育 60min。 5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去 洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。 6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 OD 值。 禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，結(jié)果判斷： 1. 試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔 OD 值平均值≥1.00； 陰性對(duì)照孔 OD 值平均值≤0.15。 2. 臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15 3. 陰性判斷：樣品 OD 值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性 4. 陽性判斷：樣品 OD 值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性 禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，試劑盒性能： 準(zhǔn)確性：陽性對(duì)照孔 OD 值平均值≥1.00；陰性對(duì)照孔 OD 值平均 值≤0.15，說明試驗(yàn)禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，結(jié)果有效。 1. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。 2. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。 3. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。 4. 有效期：6 個(gè)月 禽流感病毒（AIV）ELISA試劑盒說明書@公司新聞，免責(zé)聲明： 1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所 產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。 2. 嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者 承擔(dān)。 ELISA試劑盒用戶：為什么酶標(biāo)儀讀數(shù)時(shí)必須選用雙波長(zhǎng)？ 極威生物解答：首先，酶標(biāo)儀使用前務(wù)必預(yù)熱10-15min，使測(cè)讀結(jié)果更穩(wěn)定。其次，ELISA實(shí)驗(yàn)采用雙波長(zhǎng)測(cè)定吸光度，可以排除單波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)的測(cè)定干擾（標(biāo)本的濃度，干擾色等）。一般采用波長(zhǎng)作為參照波長(zhǎng)，在參照波長(zhǎng)下，檢測(cè)物的吸光值*小，檢測(cè)波長(zhǎng)和參照波長(zhǎng)的吸光值之差可以消除非特異性吸收；因此，雙波長(zhǎng)測(cè)定，可限度的消除指紋、雜質(zhì)及不透光的物質(zhì)對(duì)酶標(biāo)儀讀數(shù)帶來的誤差，以保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度。 
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