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· 所屬分類(lèi)：應(yīng)用方法
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活體細(xì)胞線(xiàn)粒體內(nèi)膜功能（膜電位）熒光測(cè)定試劑是一種旨在通過(guò)高度敏感的陽(yáng)離子熒光羰花青染料結(jié)合到線(xiàn)粒體基質(zhì)，其熒光的增強(qiáng)或減弱說(shuō)明線(xiàn)粒體膜電位的變化，即內(nèi)膜電負(fù)性的增高或降低，來(lái)分析線(xiàn)粒體內(nèi)膜功能的完整性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種線(xiàn)粒體制備物的功能檢測(cè)�？梢员挥糜诩�(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、衰老等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，活體檢測(cè)，操作極為簡(jiǎn)易，性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
陽(yáng)離子熒光羰花青染色劑JC-1（5,5＇,6,6＇-tetrachloro-1,1＇,3,3＇-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide）是一種對(duì)膜電位高度敏感的染色劑。它特異性地進(jìn)入線(xiàn)粒體，分布和結(jié)合在線(xiàn)粒體基質(zhì)上。線(xiàn)粒體膜電位的高低變化決定了JC-1的分布濃度。電位高，JC-1形成聚集體，而濃度高，熒光顯色為紅色或桔紅色；反之，則為綠色。熒光減弱表明線(xiàn)粒體內(nèi)膜功能受到損害。
產(chǎn)品內(nèi)容
染色液（Reagent A） 微升
稀釋液（Reagent B） 毫升
清理液（Reagent C） 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
保存方式
保存清理液（Reagent C）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；染色液（Reagent A）避免光照；有效保證6月
用戶(hù)自備
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于細(xì)胞脫離
完全細(xì)胞培養(yǎng)液（G&VS12052）：用于細(xì)胞脫落收集
1.5毫升離心管：用于活體細(xì)胞線(xiàn)粒體染色的容器
微型臺(tái)式離心機(jī)：用于細(xì)胞收集的操作
培養(yǎng)箱：用于染色孵育
（共聚焦）熒光顯微鏡：用于活體細(xì)胞線(xiàn)粒體熒光定性分析
比色皿或96孔板：用于熒光定量分析的容器
熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀：用于活體細(xì)胞線(xiàn)粒體熒光定量分析
細(xì)胞流式儀：用于活體細(xì)胞線(xiàn)粒體熒光分析
實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent A）置入冰槽里融化，稀釋液（Reagent B）放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出xx微升染色液（Reagent A）到新的1.5毫升離心管，加入xx微升稀釋液（Reagent B），混勻后，在冰槽里靜置，并標(biāo)記為染色工作液，放在暗室里。然后進(jìn)行下列操作。
一、直接法
1． 準(zhǔn)備1個(gè)12孔細(xì)胞培養(yǎng)板的待測(cè)細(xì)胞，每孔鋪滿(mǎn)率達(dá)70％（約30萬(wàn)細(xì)胞數(shù)）
2． 小心抽去細(xì)胞培養(yǎng)液
3． 輕輕沿著孔壁加入xx毫升 清理液（Reagent C）到細(xì)胞培養(yǎng)孔，覆蓋培養(yǎng)孔表面
4． 小心抽去xx毫升 清理液（Reagent C）
5． 加入xx微升含有染色液（Reagent A） 和稀釋液（Reagent B）的染色工作液，覆蓋培養(yǎng)孔表面
6． 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里，孵育20分鐘（注意避光）
7． 小心抽去xx微升染色工作液
8． 小心加入xx微升清理液（Reagent C）（注意：檢測(cè)前置于冰槽里）
9． 即刻在倒置熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察（單濾波或雙濾波）：
二、間接法
1． 準(zhǔn)備1個(gè)12孔細(xì)胞培養(yǎng)板的待測(cè)細(xì)胞，每孔鋪滿(mǎn)率達(dá)70％（約30萬(wàn)細(xì)胞數(shù)）
2． 小心移出細(xì)胞培養(yǎng)液到15毫升錐形離心管（收集懸浮細(xì)胞）
3． 加入xx毫升 清理液（Reagent C）到細(xì)胞培養(yǎng)孔，覆蓋培養(yǎng)孔表面
4． 小心移出xx毫升 清理液（Reagent C）到15毫升錐形離心管（收集洗脫細(xì)胞）
5． 加入500微升用戶(hù)自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，鋪滿(mǎn)整個(gè)培養(yǎng)孔表面
6． 置入37℃培養(yǎng)箱1分種
7． 輕輕抖動(dòng)培養(yǎng)板，使細(xì)胞脫落，然后加入1毫升完全細(xì)胞培養(yǎng)液
8． 移入15毫升錐形離心管
9． 放進(jìn) 臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
10． 小心抽去上清液
11． 加入xx微升清理液（Reagent C）
12． 用200微升槍頭上下輕柔抽吸，混勻細(xì)胞顆粒群
13． 轉(zhuǎn)入到1.5毫升離心管或細(xì)胞流式儀專(zhuān)用測(cè)試管
14． 加入xx微升含有染色液（Reagent A） 和稀釋液（Reagent B）的染色工作液
15． 輕度渦旋震蕩2秒
16． 放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里，孵育20分鐘（注意避光）
17． 放進(jìn) 臺(tái)式微型離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
18． 小心抽去上清液
19． 加入xx微升清理液（Reagent C）（注意：檢測(cè)前置于冰槽里）
上海極威生物科技有限公司（Shanghai JIwei Biological Technology Co., Ltd.）成立于上海，主營(yíng)產(chǎn)品有elisa試劑盒，大鼠elisa試劑盒，小鼠elisa試劑盒，動(dòng)物血清，細(xì)胞株，標(biāo)準(zhǔn)品，生化試劑盒等。
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)有酶聯(lián)免疫ELISA檢測(cè)、生化測(cè)試、液相氣相檢測(cè)、Icp-MS測(cè)試、載體構(gòu)建、RACE、全基因合成、線(xiàn)粒體測(cè)序、熒光定量PCR、基因克隆、定點(diǎn)突變、染色體步移、基因組全序列獲取、環(huán)境微生物多樣性、微生物基因組測(cè)序、微生物菌種鑒定、甲基化分析服務(wù)等。極威生物秉承以產(chǎn)品質(zhì)量為根本，以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，以為客戶(hù)創(chuàng)造價(jià)值為己任的精神，致力于發(fā)展中國(guó)的科研事業(yè)。
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